GTP基因组标签计划

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技术路径

一、体外实验

(一)标签细胞制备
1. 质粒构建:构建sgRNA表达质粒和KI donor质粒;
2. 细胞打靶:利用脂质体转染试剂将质粒转入“人造精子细胞”;
3. 阳性细胞筛选:经流式分选、挑取单克隆、基因型鉴定确定阳性克隆,即含标签蛋白质的“人造精子细胞”;
4. 标签细胞冻存:阳性标签细胞经支原体检测阴性后,入库液氮保存。

(二)标签细胞功能研究
标签细胞可用于标签蛋白质的表达检测,细胞内定位,标签蛋白质与蛋白质/DNA/RNA相互作用的网络分析等。

二、体内实验

(一)标签小鼠生产
所需生产的标签细胞经复苏培养后,将一个标签细胞通过显微操作技术注射到小鼠卵母细胞中(ICAHCI注射),并将重构的二细胞移到假孕母鼠体内,一步法获得标签小鼠。

(二)标签小鼠功能研究
标签小鼠可用于研究标签蛋白质在发育、衰老、组织、肿瘤或代谢疾病等生理/病理的作用和功能。

三、小鼠定制服务

本平台可快速制备各种KI小鼠,例如标签敲入、点突变、条件性点突变、条件性基因敲除、条件性基因敲入、人源化基因改造、Cre工具鼠等,欢迎咨询!



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